HPLC چیست؟ کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

folder_openآزمایشگاهی
commentبدون دیدگاه
کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

در این مقاله قصد داریم تا به صورت مختصر در مورد HPLC صحبت کنیم. این که HPLC چیست؟ چه کاربردی دارد و به چه صورتی عمل می کند. با ما همراه باشید.کلمه ی HPLC مخفف عبارت High performance liquid chromatography و به معنای «کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا» است.  HPLC شکلی پیشرفته از کروماتوگرافی مایع بوده که جهت جداسازی مخلوط‌های پیچیده از مولکول‌های موجود در سیستم‌های شیمیایی و بیولوژیکی (زیستی) به کار می‌رود. آنالیز HPLC، یک روش کروماتوگرافی عالی با دقت بسیار بالاست.

در کروماتوگرافی مایع، برای حصول اطمینان از شناسایی و آشکارسازی تمام اجزاء، انتخاب نوع آشکارسازی که استفاده می‌شود، از اهمیت فراوانی برخوردار است. پرکاربردترین آشکارسازها عبارتند از:

  • آشکارساز UV (ماوراء بنفش یا فرابنفش). این آشکاساز قادر به کنترل هم‌زمان چندین طول موج بوده است.
  • آشکارساز آرایه‌ی دیود نوری PDA که مخفف Photodiode-Array Detection است.
  • آشکار ساز طول موج متغیر VWD که مخفف عبارت Variable Wavelength Detector است. این آشکارساز نیز هنگامی به کار می‌رود که یک نمونه باید بارها تزریق شود و طول موج تغییر یابد. با این کار از شناسایی تمام پیک‌ها می‌توان مطمئن بود.

در هنگام استفاده از آشکارساز PDA می‌توان یک دامنه‌ی طول موج برنامه‌ریزی نمود و تمام ترکیباتی که در این محدوده جذب می‌شوند را طی یک آنالیز مجزا شناسایی کرد. آشکارساز PDA همچنین قادر به آنالیز خلوص پیک از طریق تطبیق طیف‌های موجود در اطراف یک پیک است. برای مثال کاربرد آن را در روش آنالیز مربوط به ایلوپریدون (داروی ضدّ روان‌پریشی) در داروسازی می‌توان مشاهده کرد.

در صورتی که نیاز به آشکارسازی و شناسایی آنالیت‌ها (گونه‌های مورد آزمایش) با جذب محدود UV یا بدون جذب آن باشد (مانند الکل‌ها، قندها، کربوهیدرات‌ها، اسیدهای چرب و پلیمرها) آشکارساز ضریب شکست (Refractive Index Detector) می‌تواند آشکارساز مناسبی باشد. عملکرد آشکارساز ضریب شکست با تشخیص ردیابی مناسب از طریق یک نویز پایین حاصل می‌گردد. این آشکارساز در میان تمام آشکارسازها، پایین‌ترین حساسیت را داراست. به همین خاطر برای استفاده در غلظت‌های بالای آنالیت مناسب است. لاکشمی و راجِش (2010) از آشکارساز ضریب شکست جهت آنالیز مقدار ووگلیبوس در فرمولاسیون‌های دارویی استفاده کردند. آشکارساز الکتروشیمیایی برای موادی که قابلیت اکسایش یا کاهش دارند استفاده می‌شود. این آشکارساز نیز به نتایج خروجی الکتریکی مربوط به جریان الکترون ناشی از یک واکنش شیمیایی که در سطح الکترود رخ می‌دهد، عکس‌العمل نشان می‌دهد.

جدول زیر، حاصل یک بررسی سیستماتیک و هدفمند در مورد جدیدترین روش‌های HPLC استفاده شده در آنالیز سیستم‌های آنالیزی دارو – نانوحامل است.

Drug/Nanocarrier System HPLC Method References
cyclosporine A/poly (methylvinylether-co-maleic anhydride) nanoparticles Ultrabase-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), ODS guard column; mobile phase: ACN and deionised water—gradient mode: 80% ACN to 100% ACN over a period of 1 min and 100% ACN isocratic; λ 205 nm; Pecchio et al. (2014)
ceftriaxone/Ag modified-magnetic nanoparticles 600 HPLC system, array detector consisted of waters 600 pump and waters 996 photodiode, C18 (125 mm×4.0 mm, 3.5 µm) column; mobile phase: 44 mL 0.2 M of buffer pH=7 sodium citrate, 4 mL 0.2 M of buffer pH=7 dibasic potassium phosphate, 40 mL of tetraheptyl-ammonium bromide, 325 mL acetonitril then water was added to make 1000 mL solution; λ 270 nm; Ahangar et al. (2014)
fluorouracil/polymeric nanoparticles Waters 2695 Alliance HPLC system, PDA detector, RP C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm); mobile phase: acetonitrile and water (10:90, v/v); λ 265 nm; de Mattos et al. (2013)
resveratrol/Poly(lactic acid) (PLA) and PLA-poly(ethylene glycol) (PLA-PEG) nanoparticles Waters 2695 Alliance HPLC system, PDA detector, RP C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm); mobile phase: methanol: water (51: 49, v/v); λ 306 nm; Lindner et al. (2013)
Quinine/polymeric nanoparticles Waters RP-18 column; mobile phase:acetonitrile:water:triethylamine (60:40:0.01 v/v/v); UV-PDA detector; λ 232 nm; Michels et al. (2016)
valsartan/nanoparticles HyperClone (Phenomenex) C18 column (250 mm×4.6 mm id, 5 μm, BDS 130 Å) C18 Phenomenex®, 4×3.0 mm id, security guard column, dual UV detector; mobile phase: 20 mM ammonium formate and acetonitrile (57:43, v/v); Kumar et al. (2015)
Lornoxicam/lipid nanoparticle formulations ODS C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 µm); mobile phase: phosphate buffer (pH, 4.5) and acetonitrile (65:35, v/v); Eluent PDA detector, λ 377 nm; Gupta et al. (2016)
JD27-loaded human serum albumin nanoparticle UV-Vis detector; Diamonsil TM ODS C18 column (4.6 mm×150 mm; 5 μm); mobile phase: water and acetonitrile (70:30) containing 0.1% phosphoric acid; λ 240 nm; Yan et al. (2015)
salbutamol/BEA zeolitic nanoparticles theophylline/BEA zeolitic nanoparticles multiple wavelength detector (MWD); Beckman-Coulter Nucleosil 100 RP (5 µm, 4.5 cm×250 cm) column; mobile phase: for theophylline ACN/water (8:92, v/v), for salbutamol ACN/MeOH/ acetic acid (70:29.5:0.5); λ 254 nm for theophylline; λ 275 nm for salbutamol. Fatouros et al. (2011)

 

 

نظرتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

Fill out this field
Fill out this field
لطفاً یک نشانی ایمیل معتبر بنویسید.

فهرست